共聚焦爬片培養(yǎng)貼壁細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：
1. 提前半小時在37°C預(yù)熱培養(yǎng)基、PBS、胰酶。
2. 準(zhǔn)備2mL和10mL移液管、1.5mL離心管、等相關(guān)材料。
實(shí)驗(yàn)方法：
1.從培養(yǎng)箱中取出，鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)：密度、細(xì)胞形態(tài)、貼壁情況等。
2.在超凈臺內(nèi)，放入預(yù)熱好的培養(yǎng)基、PBS和胰酶。點(diǎn)酒精燈，燒培養(yǎng)皿口，將原培養(yǎng)基吸掉。
3.加入適量PBS至培養(yǎng)皿底部，前后輕柔搖勻，清洗細(xì)胞。
4.去掉PBS，加入適量胰酶，靜置5-10min（時間和量根據(jù)不同細(xì)胞調(diào)整）。注意，胰酶需要預(yù)先調(diào)配好。
5.終止消化：若消化下來，在底部加適量培養(yǎng)基（根據(jù)觀察的細(xì)胞密度決定）終止消化，并用槍輕柔吹打多次，將壁上剩余細(xì)胞吹打下來，均勻后取少量計數(shù)。
6.根據(jù)需要的量稀釋細(xì)胞，細(xì)胞懸液滴滿共聚焦爬片表面后，放入培養(yǎng)箱，30分鐘左右細(xì)胞附著到爬片后，再沿內(nèi)壁添加培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。
7.細(xì)胞培養(yǎng)好后，吸取掉廢液，用鑷子夾在支架側(cè)面，取出支架。
8.雙手捏住支架兩側(cè)輕輕一拉即可輕松取出爬片，繼續(xù)接下來的培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)：
1.操作時需注意無菌操作，盡量避免污染。
2.確保培養(yǎng)皿的液體不要沾到瓶口，每次打開瓶口都需要用酒精燈消毒。
3.因?yàn)橘N壁細(xì)胞更脆弱，因此放入培養(yǎng)皿中的液體都需要37°C 預(yù)熱。
4.共聚焦爬片傾斜30°以上，輕拉，防止拉開一瞬間爬片掉落，防止爬片破裂。
5.共聚焦爬片為一次性產(chǎn)品，不可重復(fù)使用，爬片區(qū)分正反面，拆開即用！